De ELISA-test detecteert tal van ziekten, en daarom is deze op grote schaal toegepast in de geneeskunde en meer. De ELISA-test is echter vooral bekend vanwege de diagnose van de ziekte van Lyme. Wat is de ELISA-test? Hoe de resultaten interpreteren? Wat is de prijs van de test?
Inhoudsopgave:
- ELISA-test - wat detecteert het? Toepassing van de ELISA-test
- ELISA-test - wat is de test?
- ELISA-test en de ziekte van Lyme - wanneer uitvoeren?
- ELISA-test - prijs. Hoeveel kost een ELISA-test?
- ELISA-test - resultaten. Kunnen het vals-positieven zijn?
- ELISA-test - resultaten. Kunnen ze vals negatief zijn?
De ELISA-test, d.w.z. de enzymgekoppelde immunosorbent-test, is een veelgebruikte laboratoriummethode die onder andere dient voor de kwantitatieve detectie van antilichamen in het bloed.
Om deze reden is de ELISA-test gebruikt bij de diagnose van bacteriële ziekten, zoals Lyme-borreliose.
Het voordeel van de ELISA-methode is de eenvoud en de mogelijkheid van snelle implementatie en hoge gevoeligheid. De ELISA-methode wordt uitgevoerd met behulp van speciale plastic platen met putjes gevuld met bijvoorbeeld Borrelia-eiwitten (antigenen) en specifieke monoklonale antilichamen, die zijn ontworpen om antilichamen in het monster van de patiënt te detecteren.
ELISA-test - wat detecteert het? Toepassing van de ELISA-test
De hoge gevoeligheid en eenvoud van de ELISA-methode maakte deze toepasbaar bij de diagnose van vele ziekten, maar is vooral bekend als de diagnostische methode voor de ziekte van Lyme.
In het geval van de diagnose van Lyme-borreliose, de zogenaamde indirecte ELISA, waarmee specifiek IgM of IgG in het geteste materiaal kan worden gedetecteerd. Op dezelfde manier kunnen antilichamen worden gedetecteerd voor diagnose:
- virale infecties: herpesvirussen (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, hepatitisvirussen (HBV en HCV)
- protozoaire infecties: toxoplasmose, giardiasis
- auto-immuunziekten: coeliakie (anti-tTG- of anti-DPG-antilichamen), ziekte van Hashimoto (anti-TG- en anti-TPO-antilichamen), inflammatoire darmaandoeningen (anti-ASCA- en anti-ANCA-antilichamen)
- parasitaire ziekten en allergieën waarbij specifieke IgE-antilichamen worden gedetecteerd. Hun verhoogde niveau kan wijzen op de aanwezigheid van allergieën, bijv. Voor pollen en voedsel, of parasitaire invasie (gewapende lintworm, menselijke rondworm)
Er zijn ook aanpassingen aan de ELISA-methode (de zogenaamde sandwich-ELISA), waardoor een monster van andere eiwitten dan antilichamen kan worden gedetecteerd. Dan is het doel van de test om in het biologisch materiaal te detecteren:
- fragmenten van virussen of bacteriën, meestal zijn het antigenen die kenmerkend zijn voor een bepaald pathogeen
- serumhormonen, bijv. oestrogeen, prolactine, TSH, fT4, cortisol
- enzymen, bijv. calprotectine, pancreaselastase, alkalische fosfatase
- tumormarkers, bijvoorbeeld CA-125
- de aanwezigheid van medicijnen in het serum
Deze methode is ook toepasbaar in de voedingsindustrie, waar het sporen van allergenen (bv. Melk, pinda's), GGO's of toxines in voedsel kan detecteren.
ELISA-test - waar gaat het over?
De diagnose van bijvoorbeeld Lyme-borreliose met de ELISA-methode bestaat uit het detecteren van immuuneiwitten in biologisch materiaal - antilichamen die ontstaan tijdens de respons tegen Borrelia-antigenen.
De antilichamen worden getest in twee klassen, IgM en IgG. IgM's zijn de eerste antilichamen die in het lichaam verschijnen wanneer ze in contact komen met bacteriën, en ze nemen na verloop van tijd af.
Hun plaats wordt ingenomen door persistente IgG-antistoffen die tientallen jaren in het lichaam kunnen blijven.
Op deze manier wordt de aanwezigheid van bacteriën in het lichaam indirect getest door antilichamen te detecteren die specifiek gericht zijn tegen Borrelia spirocheten.
Antilichamen in verschillende stadia van infectie kunnen gericht zijn tegen een verscheidenheid aan Borrelia-eiwitten. In een vroeg stadium is het bijvoorbeeld het p41-eiwit.
In de latere stadia beginnen er steeds meer eiwitten te verschijnen, zoals p21, p30, p39, p43. Dit is de reden waarom de diagnose van de ziekte van Lyme buitengewoon moeilijk is.
De selectie van bacteriële eiwitten is uitermate belangrijk om de test een hoge diagnostische waarde te geven. Daarom moeten routinematig bij de diagnose van de ziekte van Lyme, II-generatie of III-generatie ELISA-tests worden gebruikt, waarbij sets van eiwitten worden geselecteerd om het meest betrouwbare resultaat te verkrijgen.
ELISA-test en de ziekte van Lyme. Wanneer te doen?
Lyme-borreliose is een bacteriële ziekte die wordt veroorzaakt door de bacterie Borrelia burgdorferi en zijn vele variëteiten.
De diagnose van de ziekte is niet eenvoudig vanwege de complexiteit van de immuunrespons tegen Borrelia en de onvolkomenheden van laboratoriummethoden.
De meest gebruikte laboratoriummethode is de zeer gevoelige ELISA-methode, die specifieke antilichamen detecteert die zijn opgewekt tegen bacteriële eiwitten.
Bij de diagnose van Lyme-borreliose wordt een indirecte ELISA-methode gebruikt waarin de volgende fasen worden onderscheiden:
- incubatie van de putjes op de plaat met materiaal dat van de patiënt is verzameld, bijv. serum. Als er antistoffen tegen Borrelia in het geteste materiaal zitten, binden deze zich aan eiwitten aan de onderkant van het reactieputje
- vervolgens wordt het overtollige serum uitgespoeld met een speciale wasvloeistof (buffer) en de zogenaamde conjugaat, d.w.z. een antilichaam gekoppeld aan een enzym dat zich bindt aan eerder gekoppelde antilichamen in de reactieputjes
- dan wordt het substraat voor het conjugaat toegevoegd en treedt er een kleurreactie op (positief resultaat) of geen kleurreactie (negatief resultaat)
- de laatste stap is het aflezen door de lezer (spectrofotometer) van de concentratie antilichamen tegen Borrelia in het serum van de patiënt
De ELISA-methode voor de ziekte van Lyme wordt uitgevoerd uit bloed, en in het geval van neurologische symptomen (neuroborreliose) ook uit het hersenvocht.
Het gewrichtsvocht mag niet worden getest, aangezien de kans op vals-positieve resultaten groot is.
De basis voor de diagnose van de ziekte zijn klinische symptomen die erop wijzen, bevestigd door de resultaten van laboratoriumtests.
De toevoeging van een laboratoriumtest zonder symptomen geeft geen toestemming voor de diagnose van de ziekte van Lyme, aangezien is aangetoond dat ook bij gezonde mensen antistoffen tegen Borrelia worden aangetroffen.
De serologische diagnose van Lyme-borreliose begint met een semi-kwantitatieve ELISA-screeningstest. Als het resultaat negatief is, betekent dit dat er geen Borrelia-spirocheten zijn gedetecteerd of dat het resultaat een vals negatief is.
Als het resultaat positief of zwak positief (twijfelachtig) is, moet een bevestigende Western blot-test worden uitgevoerd, die wordt gekenmerkt door een hoge specificiteit.
Dit is om de "waarheidsgetrouwheid" van de resultaten verkregen met de ELISA-methode te bevestigen. Tijdens de diagnostiek kunt u geen van de bovenstaande stappen overslaan en bijvoorbeeld direct diagnostiek uitvoeren met de Western blot-methode of een diagnose stellen op basis van alleen een positief ELISA-resultaat.
In Polen eindigt de diagnose van de ziekte van Lyme vaak in de eerste screeningsfase, wat een verkeerde interpretatie van positieve of zwak positieve resultaten veroorzaakt.
Aanbevolen artikel:
Lymfocyttransformatie-test (LTT) Goed om te wetenELISA-test - prijs. Hoeveel kost een ELISA-test?
De test kost ongeveer PLN 60 en is meteen klaar. U kunt echter ongeveer drie maanden wachten op de uitslag van de verwijzing.
ELISA-test - resultaten. Kunnen het vals-positieven zijn?
Fout-positieve resultaten zijn het gevolg van de kruisreactiviteit van IgM-antilichamen met andere eiwitten. Antilichamen die door het lichaam worden geproduceerd, kunnen een antigeen van andere micro-organismen 'ten onrechte' herkennen als het Borrelia-antigeen.
De meest voorkomende "fouten" komen voor bij mensen die zijn geïnfecteerd met treponema pallidum, herpesvirussen, en bij mensen met systemische lupus erythematosus en andere reumatische aandoeningen.
ELISA-test - resultaten. Kunnen ze vals negatief zijn?
Vals-negatieve resultaten kunnen in een vroeg stadium van de infectie optreden, waarna de test na ongeveer 3-4 weken moet worden herhaald. Dit heet serologisch venster, dat is de eerste infectieperiode waarin het lichaam er nog niet "in geslaagd" is om specifieke antilichamen te produceren.
Hetzelfde geldt voor mensen met immunodeficiëntie die niet genoeg antistoffen aanmaken.
Een groot probleem, vooral bij zeer intense infecties, is het verschijnen van de zogenaamde immuuncomplexen die bestaan uit Borrelia-antigenen en specifieke antilichamen daarvoor.
Als resultaat worden de antilichamen "onzichtbaar" voor veelgebruikte methoden zoals ELISA, en hoewel ze aanwezig zijn in het geteste materiaal, kunnen ze niet worden gedetecteerd.
In dergelijke gevallen kan het laboratorium gebruik maken van het afbreken van immuuncomplexen. Deze behandeling is bedoeld om de antilichamen vrij te maken. Deze methode wordt echter niet veel gebruikt vanwege het gebrek aan standaardisatie in laboratoria.
Nuttig om te wetenWaarom is de diagnose van de ziekte van Lyme niet eenvoudig?
Dit komt door de complexiteit van de immuunrespons tegen Borrelia en de beperkingen van laboratoriummethoden. De diversiteit aan variëteiten en de opkomst van nieuwe die infecties veroorzaken, vooral op het Europese continent, vergemakkelijken de ontwikkeling van effectieve diagnostische methoden niet.
Recentelijk zijn er meer soorten in Europa verschenen, zoals Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana en Borrelia spielmanii. Bovendien kunnen Borrelia-spirocheten in het lichaam in cysten veranderen of op plaatsen van het lichaam blijven die niet toegankelijk zijn voor cellen van het immuunsysteem.
Dus "onzichtbaar" zijn voor het immuunsysteem. Bovendien is aangetoond dat de weefsels fragmenten van bacteriën kunnen bevatten die sterk pro-inflammatoire eigenschappen hebben. Ze worden verondersteld verantwoordelijk te zijn voor de chronische symptomen van de ziekte van Lyme, ondanks negatieve laboratoriumtestresultaten.
Literatuur
1. Witecka-Knysz E. et al. Ziekte van Lyme: waarom is de diagnose zo moeilijk? Laboratoriumdiagnostiek april 2007.
2. Moore A. et al. Huidige richtlijnen, gemeenschappelijke klinische valkuilen en toekomstige aanwijzingen voor laboratoriumdiagnose van de ziekte van Lyme, Verenigde Staten. Emerg Infect Dis. Juli 2016; 22 (7).
3. Laboratoriumdiagnostiek van door teken overgedragen ziekten Aanbevelingen van de werkgroep: Nationale Kamer van Laboratoriumdiagnostici, Nationaal Instituut voor Volksgezondheid - Nationaal Instituut voor Hygiëne, Nationaal adviseur op het gebied van infectieziekten, Afdeling Infectieziekten en Neuro-infecties, Medische Universiteit van Białystok, Poolse Vereniging voor Virologie, Warschau 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzyme-linked immunosorbent Assay (ELISA) van A tot Z. Springer 2017.
